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昆蟲表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)蛋白的優(yōu)缺點(diǎn)及其制備步驟

發(fā)表時(shí)間:2023-05-09 訪問次數(shù):1435

  昆蟲表達(dá)系統(tǒng)相信大家都不會(huì)陌生,它是四大蛋白表達(dá)系統(tǒng)之一(主要包含:原核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)、酵母表達(dá)系統(tǒng)、昆蟲表達(dá)系統(tǒng)以及哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng))。關(guān)于昆蟲表達(dá)系統(tǒng)我們在前面和大家簡單介紹過,今天我們再和大家具體聊聊有關(guān)昆蟲表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)缺點(diǎn)及其詳細(xì)的制備步驟。

  昆蟲表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn):

  1、能夠輕松時(shí)間糖基化、乙?;⒘姿峄确g修飾操作;

  2、分子特性相對簡單,使得其操作起來更加的簡單;

  3、因?yàn)槠浼?xì)胞能夠懸浮生長,使得其培養(yǎng)起來更加的簡單;

  4、對于外源基因能夠?qū)崿F(xiàn)高效表達(dá)且其繁殖不受外源基因影響;

  昆蟲表達(dá)系統(tǒng)的步驟:

  1、引物設(shè)計(jì)與合成

  選擇合適的基因序列,并將目的基因引入到序列中;

  2、基因擴(kuò)增與克隆

  通過所得RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)率,合成我們所需的cDNA,并以cDNA為模板,對其進(jìn)行擴(kuò)增和測序;

  3、病毒質(zhì)粒構(gòu)建

  將擴(kuò)增所得基因克隆到質(zhì)粒中,并對其進(jìn)行培育、擴(kuò)增;

  4、表達(dá)蛋白

  通過設(shè)計(jì)合理的表達(dá)環(huán)境,對所得基因序列進(jìn)行表達(dá),獲得蛋白表達(dá)產(chǎn)物的混合液;

  5、蛋白純化及鑒定

  通過蛋白純化的手段對蛋白進(jìn)行提取和純化,并對純化后的蛋白進(jìn)行鑒定,以測定所得蛋白是否符合我們需求;

  大家應(yīng)該不難看出,昆蟲表達(dá)系統(tǒng)和其他表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)步驟之間并不存在太大的差別,只是在選擇宿主方面存在著不同,其他步驟大概類似。但是,想要表達(dá)成功,則有很多細(xì)節(jié)方面需要引起注意,而恰恰是這些細(xì)節(jié)制約著所得蛋白是否能夠滿足需求。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供昆蟲表達(dá)蛋白服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來電咨詢。

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