重組蛋白表達(dá)是現(xiàn)階段我們生產(chǎn)蛋白產(chǎn)品最常用的方法之一，它在極大程度上解決了天然蛋白抗體解決不了的問(wèn)題。但是，在日常我們表達(dá)蛋白的過(guò)程中，即便是按照實(shí)驗(yàn)順序嚴(yán)格執(zhí)行，依然會(huì)遇到很多的問(wèn)題，最終導(dǎo)致蛋白表達(dá)失敗的情況。在這里，普健生物具體和大家聊聊蛋白表達(dá)的一些常見(jiàn)問(wèn)題，及其對(duì)應(yīng)的解決辦法。

　　1、設(shè)計(jì)方面的問(wèn)題

　　如果表達(dá)出來(lái)的蛋白出現(xiàn)密碼子移位、稀有子密碼問(wèn)題、信號(hào)肽問(wèn)題、蛋白大小問(wèn)題、標(biāo)簽蛋白選擇問(wèn)題以及GC含量太高等問(wèn)題時(shí)，就是因?yàn)樾蛄性O(shè)計(jì)方面的問(wèn)題。這個(gè)時(shí)候我們就需要回憶反思一下，看看具體的問(wèn)題出來(lái)哪里，然后有針對(duì)性地進(jìn)行解決;

　　2、操作過(guò)程方面的問(wèn)題

　　操作過(guò)程方面的問(wèn)題主要出現(xiàn)在質(zhì)粒構(gòu)建和表達(dá)工程菌使用等方面的失誤所造成。在質(zhì)粒構(gòu)建完成后，必須測(cè)序確認(rèn)，保證無(wú)突變更不能出現(xiàn)堿基多余或是缺失，并確認(rèn)外源片段插入后讀框碼與載體步調(diào)完全一致才行。

　　而針對(duì)工程菌的使用，必須確認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)有效，與載體質(zhì)粒配套，否則，容易造成表達(dá)質(zhì)粒丟失的情況;

　　3、蛋白容易降解的問(wèn)題

　　很多蛋白在完成表達(dá)等一系列的過(guò)程后，我們卻無(wú)法分離或提純出來(lái)，主要是因?yàn)閯偙磉_(dá)出來(lái)就被細(xì)菌內(nèi)的蛋白酶降解掉了，這個(gè)時(shí)候我們就需要看看過(guò)程，尋找一下相應(yīng)的解決辦法;

　　4、培養(yǎng)基的問(wèn)題

　　一些蛋白在LB培養(yǎng)基中表達(dá)不成功，但是換成TB或2*YT培養(yǎng)基后就能表達(dá)成功。所以，當(dāng)無(wú)法表達(dá)成功時(shí)，我們可以考慮更換培養(yǎng)基來(lái)繼續(xù)表達(dá);

　　5、分子量異常的問(wèn)題

　　有一些蛋白的分子量和我們的預(yù)想有著一定的偏差，這個(gè)時(shí)候我們可以分析一下蛋白，看其本身氨基酸組合是否符合均態(tài)分布的規(guī)律。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，我們需要仔細(xì)對(duì)比誘導(dǎo)/非誘導(dǎo)菌體蛋白帶譜差異，再結(jié)合數(shù)據(jù)進(jìn)行判斷;

　　當(dāng)然了，蛋白表達(dá)中可能會(huì)遇到各種各樣的問(wèn)題，并不是我們?nèi)缟纤f(shuō)的幾種，我們也可以結(jié)合實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，對(duì)比相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行處理。當(dāng)然了，實(shí)在解決不了的時(shí)候，可以考慮通過(guò)專業(yè)的蛋白表達(dá)公司來(lái)處理。普健生物專業(yè)為您提供蛋白抗體表達(dá)服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢。