重組蛋白表達過程中，合適的技術路線會讓整個實驗過程事半功倍，雖然說，經(jīng)過多年的發(fā)展，技術已經(jīng)非常成熟了，但是，這也是一個非常依賴經(jīng)驗的技術。所以，對于一些新手來說，在重組蛋白表達過程中，有很多需要注意的問題。有鑒于此，普健生物在這里和大家具體聊聊有關重組蛋白表達和純化過程中常常會遇到的問題。

　　1、蛋白不表達

　　蛋白不表達的原因有很多，一般來說，大部分的都可以通過如下幾個方面來判斷。蛋白大?。阂话銇碚f，小于10kd或大于100kd的蛋白都是比較難以表達的;表達菌株與質(zhì)粒是否配套;表達條件是否合適，比如誘導劑、溫度等;培養(yǎng)基選擇：對于不同的表達需求，需要搭配不同的培養(yǎng)基選擇;當然了，表達成功與否也和表達量太低或是降解太快有關;

　　2、蛋白降解

　　在純化過程中，常常會因為蛋白降解而導致表達失敗。一般是因為細菌本身的蛋白酶所有引起的，所以，需要全程添加蛋白酶抑制劑;

　　3、蛋白純度不高

　　蛋白純化過程時并不是每次都完美洗去雜質(zhì)，特別是鎳柱純化，雜蛋白較多，需要結合多種純化方式聯(lián)用;

　　4、條帶與預測不符

　　蛋白表達后常常會以多種狀態(tài)存在，因為電荷分布，會導致遷移速率有一定的變化，所以，會造成條帶偏移，復性后的蛋白會存在著大小偏移的現(xiàn)象，而且翻譯后修飾也會造成條帶大小不一;

　　當然了，重組蛋白表達過程中會遇到的問題有很多，無論是誘導溫度、濕度等方面的影響，以及各種抑制劑的添加，控制好細節(jié)方面的問題才能保證蛋白的表達。在研究過程中遇到問題，需要進行大量的排查、試錯，這樣才能在面對一個全新蛋白時，更好地進行控制。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供重組蛋白表達服務，如果您有相關需求，歡迎來電咨詢。