在雜交瘤細(xì)胞制備的過程中，雖然篩選出來的雜交瘤細(xì)胞能夠通過冷凍保存，但是依然存在細(xì)胞失活的風(fēng)險(xiǎn)。所以，為了克服雜交瘤細(xì)胞保存的問題，我們常常會(huì)選擇對(duì)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行測(cè)序，能夠快速且準(zhǔn)確地進(jìn)行后期的抗體制備。今天，普健生物和大家具體聊聊有關(guān)雜交瘤細(xì)胞測(cè)序的具體步驟和應(yīng)用。

　　雜交瘤細(xì)胞測(cè)序的具體步驟：

　　1、雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)。先取出雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇，然后在37度的環(huán)境下培養(yǎng)10天，至細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛時(shí)再收集細(xì)胞;

　　2、mRNA提取。裂解細(xì)胞后加入氯仿，離心15分鐘后提取上清液。取上清液并加入異丙醇離心10分鐘，取沉淀洗凈，晾干后加入適量DEPC溶解;

　　3、轉(zhuǎn)率cDNA。選擇合適的反應(yīng)體系進(jìn)行擴(kuò)增，合成cDNA第一條鏈，而后根據(jù)已知的cDNA合成第二條鏈;

　　4、獲得可變區(qū)基因。對(duì)cDNA進(jìn)行擴(kuò)增，獲得輕鏈/重鏈可變區(qū)基因;

　　5、抗體測(cè)序。對(duì)基因進(jìn)行陽性克隆并測(cè)序;

　　6、分析測(cè)序結(jié)果。通過生物信息學(xué)分析，得到抗體序列;

　　雜交瘤細(xì)胞測(cè)序的優(yōu)勢(shì)：

　　雜交瘤測(cè)序可以更為準(zhǔn)確地進(jìn)行質(zhì)譜分析，能夠提供更加準(zhǔn)確且可靠的結(jié)果;

　　雜交瘤細(xì)胞測(cè)序的應(yīng)用：

　　1、用于進(jìn)行相關(guān)基因測(cè)序的專利性保護(hù);

　　2、用于保存測(cè)序信息，防止雜交瘤細(xì)胞丟失單抗信息;

　　3、用于表達(dá)純度更高的重組單克隆抗體;

　　4、縮短雜交瘤細(xì)胞克隆的耗時(shí)過程，加速單克隆抗體生產(chǎn);

　　5、提升單抗親和力;

　　6、構(gòu)建嵌合抗體以及抗體人源化;

　　雜交瘤抗體測(cè)序能夠帶來的好處是毋庸置疑的，不僅能夠有效降低抗體制備的批次性差異問題，更是能夠在極大程度上提升抗體的親和力。當(dāng)然了，測(cè)序的過程相對(duì)來說要復(fù)雜一些，需要一定的技術(shù)支持。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供雜交瘤抗體測(cè)序服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。