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兔單克隆抗體作為高靈敏度檢測(cè)工具在植物學(xué)中的應(yīng)用

發(fā)表時(shí)間:2023-10-08 訪問(wèn)次數(shù):422

薩摩矮病毒(Satsuma dwarf virus,SDV)自1952年被初次描繪為植物移轉(zhuǎn)病癥(Yamada & Sawamura,1952)后,其存在可回溯到二十世紀(jì)三十年代,在日本的靜岡縣,它一直被視為一種神秘的疾病。直到1962年,人們才發(fā)現(xiàn)了這種病毒的實(shí)體——直徑在26-28nm之間的二十面體病毒顆粒(Saito & Hibino,1962)。更令人驚奇的是,在日本的一些農(nóng)村地區(qū),還出現(xiàn)了柑橘花葉病、臍橙感染斑駁病和旱臺(tái)矮病,所有這些都被確認(rèn)為由類(lèi)似病毒所引起的。

薩摩矮病毒(Satsuma dwarf virus, SDV)及其相關(guān)病毒在柑橘(Citrus unshiu Marc.)中引起嚴(yán)重的疾病,受影響的樹(shù)木表現(xiàn)為矮化和生長(zhǎng)不良,產(chǎn)量逐漸下降。柑橘花葉病導(dǎo)致柑橘等柑桔品種果皮出現(xiàn)各種綠色花紋,商業(yè)價(jià)值下降。這些病毒被認(rèn)為通過(guò)嫁接和土壤傳播。目前,沒(méi)有有效的措施從受感染的樹(shù)木上清除這些病毒。因此,及早發(fā)現(xiàn)并消除受感染的樹(shù)木非常重要,特別是對(duì)于最大限度地減少與這些病毒感染相關(guān)的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

SDV和SDV相關(guān)病毒的二十面體病毒粒子含有二分正義單鏈RNA基因組(RNA1;7.0 kb,RNA2;5.4 kb)。所有病毒粒子均由RNA42編碼的兩種外殼蛋白(大成分22 kDa和小成分2 kDa)組成。SDV和SDV相關(guān)病毒已通過(guò)PCR及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)進(jìn)行檢測(cè)。由于PCR和ELISA需要專(zhuān)門(mén)的技術(shù)和昂貴的設(shè)備和試劑,因此已經(jīng)開(kāi)發(fā)出一種免疫層析測(cè)定(ICA)用于在現(xiàn)場(chǎng)樣品中檢測(cè)這些病毒。特別是,Kusano等人開(kāi)發(fā)的ICA系統(tǒng)由于其更高的靈敏度和可靠性,不僅可用于診斷 SDV,還可用于診斷 SDV 相關(guān)病毒,例如柑橘花葉病毒(CiMV)和臍橙傳染性斑駁病毒(NIMV),被廣泛應(yīng)用于種植領(lǐng)域。然而,最近報(bào)道了一種新型CiMV分離株——在日本愛(ài)媛縣發(fā)現(xiàn)的其中一種分離株CiMV Az-1(B291)導(dǎo)致廣泛感染,并對(duì)薩摩柑橘種植造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。新型的CiMV分離株難以使用ICA系統(tǒng)進(jìn)行鑒定,因此迫切需要開(kāi)發(fā)一種新的診斷系統(tǒng)來(lái)檢測(cè)這些分離株。

 

為了開(kāi)發(fā)ICA試劑盒等診斷系統(tǒng),開(kāi)發(fā)高特異性和高親和力的單克隆抗體(mAb)至關(guān)重要。研究人員為了獲得抗CiMV單克隆抗體(mAb),通過(guò)對(duì)應(yīng)于CiMV外殼蛋白中11-475殘基(485 aa)的肽對(duì)家兔進(jìn)行免疫,因?yàn)橥每贵w具有高親和力,可以成為診斷的有力工具。

最終獲得的兔抗CiMV單克隆抗體使用表面等離子體共振(SPR)進(jìn)行動(dòng)力學(xué)檢測(cè),顯示出單克隆抗體(mAb)均對(duì)CiMV肽具有高親和力。為了確認(rèn)本研究獲得的單克隆抗體(mAb)是否檢測(cè)到葉片中的CiMV和SDV樣病毒,通過(guò)ELISA和斑點(diǎn)印跡分析對(duì)單克隆抗體(mAb)進(jìn)行了評(píng)估。結(jié)果表明,研究獲得的單克隆抗體(mAb)可識(shí)別CiMV Az-1(B291)分離株。通過(guò)利用這些mAb,研究人員期望可以開(kāi)發(fā)出一種針對(duì)CiMV Az-1(B291)分離株的靈敏且簡(jiǎn)單的診斷試劑盒。

目前,基于雜交瘤技術(shù)、噬菌體技術(shù)和單B細(xì)胞技術(shù)制備單克隆抗體(mAb)是目前先進(jìn)且成熟的技術(shù)路線。普健生物擁有基于以上三種技術(shù)的抗體開(kāi)發(fā)平臺(tái),能滿(mǎn)足您從抗原制備、蛋白重組及純化、動(dòng)物免疫到抗體生產(chǎn)、標(biāo)記、檢測(cè)、測(cè)序在內(nèi)的一站式服務(wù)。普健生物目前還推出了快速兔單克隆抗體定制服務(wù),運(yùn)用噬菌體展示技術(shù),可直接在高庫(kù)容的兔源天然抗體庫(kù)淘選多種靶點(diǎn)?;蚋鶕?jù)客戶(hù)需求,定制構(gòu)建針對(duì)某一種或某幾種靶蛋白的兔免疫抗體文庫(kù),篩選高親和力兔單克隆抗體序列,最終重組表達(dá)成完整的兔單抗。

 

服務(wù)優(yōu)勢(shì)

多樣性百億級(jí)別兔源 scFv 天然抗體文庫(kù):

1. 定制化抗體文庫(kù):改良版兩步法建庫(kù)方案可最大限度的減少錯(cuò)誤序列,保證抗體庫(kù)多樣性和高庫(kù)容

2. 高質(zhì)量多維度文庫(kù) QC 報(bào)告:全面體現(xiàn)文庫(kù)多樣性分布情況

3. 可接受多類(lèi)型靶標(biāo)抗體篩選:蛋白,多肽,小分子,細(xì)胞表面蛋白等

4. 可根據(jù)項(xiàng)目要求定制淘選方案:可提供固相淘選,液相淘選和細(xì)胞淘選三種淘選方案,也可根據(jù)具體項(xiàng)目要求組合使用,最大化增加淘選成功率

 

案例展示

 

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