大腸桿菌表達系統(tǒng)作為最常用來進行蛋白表達的五大系統(tǒng)之一，已經(jīng)算得上是非常成熟地表達系統(tǒng)了。相對其他系統(tǒng)而言，其遺傳背景清晰、操作簡單、表達水平高、成本低、周期短等特點，使得其的使用非常的廣泛，重組蛋白表達也常常會使用到大腸桿菌。那么，您知道大腸桿菌表達重組蛋白時常常會遇到哪些問題嗎?今天普健生物就和您具體聊聊。

　　1、為什么要用到大腸桿菌表達系統(tǒng)?它的優(yōu)勢有哪些?

　　我們之前說到過，大腸桿菌繁殖速度快，大概20分鐘就能實現(xiàn)倍增，而且轉(zhuǎn)染率高;容易實現(xiàn)高密度培養(yǎng)，可以通過溫度來實現(xiàn)直接控制;

　　2、哪些方法可以去除蛋白標簽?

　　去除重組蛋白標簽的方法主要有兩種：酶消化法和化學裂解法。酶消化法其實就是利用腸激酶、凝血酶、煙草蝕刻病毒蛋白酶等去溢出蛋白標簽的方式，是現(xiàn)階段最常用的標簽去除方法?；瘜W裂解法他剛才用于融合伴侶蛋白的移除，使用范圍相對來說要窄一些，但是勝在價格便宜;

　　3、所謂的最合適的表達宿主有哪些?

　　其實所的最合適的表達宿主需要結(jié)合實際情況以及蛋白需求來進行選擇，成本投入不同、技術(shù)實力不同等選擇的宿主也是各不相同。重組蛋白原核表達最常采用BL21和K-12來作為表達宿主;

　　4、為什么會出現(xiàn)低表達甚至無表達?

　　誘導前后蛋白純在毒素或者表達過程中密碼子有偏向性都會造成蛋白表達過低或是無表達的情況。我們可以通過控制本底表達水平、控制誘導表達水平、優(yōu)化質(zhì)粒DNA等方式來進行調(diào)控;

　　5、蛋白包涵體形成的原因有哪些?

　　蛋白形成的過程中如果形成了不正確的二硫鍵、出現(xiàn)錯誤折疊、缺少翻譯后修飾等過程都可能會造成蛋白包涵體形成。我們可以通過表達分子伴侶、移除誘導劑、低溫誘導表達、改變?nèi)诤习閭H蛋白、該表表達宿主等一系列的方式來解決這個問題;

　　總的來說，這些都是我們在操作中會出現(xiàn)的一些小問題，但是，也恰恰是這些小問題制約重組蛋白表達成功與否。所以，在進行重組蛋白表達時，我們需要有專業(yè)的技術(shù)支持，用于解決各類可能會在遇到的問題。作為一家擁有十余年蛋白抗體制備經(jīng)驗的公司來說，普健生物專業(yè)為廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)的蛋白抗體制備服務，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。