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重組抗體表達(dá)項(xiàng)目案例

發(fā)表時(shí)間:2022-01-22 訪問次數(shù):3092

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>

  本案例基于普健自有哺乳表達(dá)系統(tǒng)—高產(chǎn)量pATX系列載體及馴化CHO系列細(xì)胞,通過密碼子優(yōu)化,基因合成方法,合成重鏈和輕鏈的可變區(qū),再分別通過亞克隆的方式將可變區(qū)構(gòu)建至PATX系列表達(dá)載體,雙質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染XtenCHO細(xì)胞,通過SDS-PAGE驗(yàn)證重組抗體表達(dá)情況,經(jīng)表達(dá)驗(yàn)證后,擴(kuò)大培養(yǎng)收集細(xì)胞上清并通過proteinA親和柱純化獲得重組抗體。

二、實(shí)驗(yàn)方案

  (1)以客戶提供的重鏈輕鏈序列為模板,通過密碼子優(yōu)化,選擇更適宜XtenCHO細(xì)胞系的基因序列,進(jìn)而確         定表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建方案。

  (2)采用普健生物自主載體PATX進(jìn)行構(gòu)建,經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證無誤后,提取無內(nèi)毒素質(zhì)粒。

  (3)轉(zhuǎn)染前,確定XtenCHO細(xì)胞狀態(tài),待轉(zhuǎn)染完成,培養(yǎng)數(shù)天后收取上清,通過SDS-PAGE驗(yàn)證重組抗體表         達(dá)情況,最后通過Protein A純化法獲得重組抗體。

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

  (1)抗體純度鑒定

重組抗體

圖 1. 抗體質(zhì)檢圖. 考馬斯亮藍(lán)染色.

A. 還原PAGE. B. 非還原 PAGE.

  (2)通過SEC-HPLC進(jìn)一步純化,獲得單一峰的重組抗體,HPLC檢測(cè)純度在98%。

重組抗體

  (3)抗體交付

  純化抗體產(chǎn)量:5L表達(dá)體系

抗體 濃度及分裝 數(shù)量 質(zhì)量
抗體 A 25 mg/ml;1ml/管。 20管 500 mg

         注:內(nèi)毒素水平:0.45 EU/ml

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